INTRODUCCIÓN

Se ha definido como onda folicular a la activación y crecimiento simultáneo de un grupo de folículos terciarios, donde uno de ellos llamado folículo dominante, continúa su crecimiento y diferenciación, mientras que los otros (folículos subordinados), se atresian (Gigli et al., 2006).

A finales de la década del 80 y comienzo de los 90 con el empleo de la ultrosanografía en la especie bovina, se logró determinar, que a lo largo del ciclo estral existen patrones de dos o tres ondas de crecimiento folicular (Bo y Mapletoft, 1999; Gordon, 1996; Noakes et al., 2009), aunque pueden existir patrones de una, o cuatro ondas, por lo general cuando se trata de animales Bos indicus (Ginther et al., 1989;Savio et al., 1988).

Los estudios de la dinámica folicular constituyeron la base de los trabajos utilizados para sincronizar el estro con mayor precisión, incrementar la respuesta superovulatoria y la cantidad de ovocitos colectados en las sesiones de OPU (Bridges y Fortune, 2003; Patterson et al., 2003). De

manera que los conocimientos sobre la dinámica folicular pueden ayudar a mejorar la eficiencia de las biotecnologías de la reproducción.

En esta investigación se planteó como objetivo caracterizar algunas variables de la dinámica folicular en novillas de la raza Simmental Fleckvieh en condiciones de clima tropical de sabana.

Parte Experimental

Como material experimental se emplearon 8 novillas cíclicas de la raza Simental Fleckvieh, con edades entre 16 y 18 meses, peso de 350 a 400 Kg y condición corporal de 3.25 a 3.50 (en escala de 1 a 5).

Se estudiaron 16 ciclos estrales (dos ciclos consecutivos por animal). Se realizaron observaciones ecográficas diariamente a partir de las manifestaciones de celo.

El celo fue sincronizado empleando dispositivos intravaginales liberadores de progesterona (Sincrogest®), benzoato de estradiol (Over®), prostaglandina sintética (Sincroplex®) y PMSG (Folligon®), en un protocolo que se describe a continuación:

Día 0: Dispositivo intravaginal + 2 mg de benzoato de estradiol

Día 8: Retiro del dispositivo + 2 mL de prostaglandina + 300 UI de PMSG Día 9: 1 mg de benzoato de estradiol

Día10: Celo e inicio de la primera observación ultrasonográfica.

La exploración ovárica se realizó empleando un ultrasonido portátil, acoplado a un transductor lineal de 6,5 MHz, el cual fue introducido vía transrectal y colocado sobre la superficie de los ovarios, lo que permitió visualizar en la pantalla del ultrasonido las estructuras presentes (folículos y cuerpos lúteos) y evaluar su número y tamaño. Los folículos observados fueron medidos y clasificados en tres tamaños: pequeños (≤ 5,0 mm), medianos (6,0 a 10,0 mm) y grandes (≥ 11,0 mm).

Parámetros evaluados:

• Número de folículos

• Tamaño de los folículos

· Día dentro del ciclo estral.

Análisis estadístico:

Se utilizó estadística descriptiva para las variables: días de la onda con el mayor número de

folículos pequeños y día del diámetro máximo del folículo dominante.

Para las variables número de folículos por tamaño y diámetro máximo del fólico dominante se empleó un análisis de varianza según DCA y se aplicó dócima de t de student para P<0.05, considerando como efecto las ondas y los ciclos evaluados.

El modelo matemático empleado fue el siguiente:

𝒚𝒊𝒋 = 𝝁 + 𝒕𝒊 + 𝒆𝒊𝒋

𝒚𝒊𝒋 = Variable

𝝁 = Media

t = Efecto de ciclo o efecto onda

𝒆 = Error

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Como se aprecia en la tabla uno, se encontraron diferencias estadísticas significativas (P < 0.001) para el número de folículos pequeños entre ciclos Este hallazgo ha sido respaldado por distintos autores, los cuales han indicado que los mismos animales puede presentar patrones de desarrollo folicular diferentes entre ciclos (Adams et al., 2008;Mello et al., 2014). Solís y de Armas (2010), bajo las mismas condiciones climáticas que en este trabajo y con animales mestizos Simmental por Brahman reportaron que un mismo animal podía presentar diferentes patrones de desarrollo folicular en cada ciclo.

Tabla 1.
Promedio de folículos clasificados según tamaño, en los ciclos estrales de dos ondas.

Valores en la misma fila con P<0,05 difieren entre sí.

Folículos clasificados según tamaño ( ±EE)			Ciclos
	n	Primero	Segundo	Significación
Pequeños	532	7.25 ±0.29	8.89 ±0.25	P<0.0001
Medianos	267	1.64 ±0.08	1.74 ±0.07	P=0.3772
Grandes	158	1.16 ±0.04	1.09 ±0.03	P=0.1652

Se encontró diferencias altamente significativas (P < 0,0001) para número de folículos pequeños entre la primera y la segunda onda (Tabla 2). La polémica sobre la respuesta folicular entre la

primera y la segunda onda, ha sido debatida en décadas posteriores por muchos autores (Adams et al., 1994;Grasso et al., 1989; Ireland y Roche, 1983; Lindsell et al., 1985), desde los inicios de los tratamientos superovulatorios.

Finalmente, los resultados en la práctica llevaron a la determinación general de realizar el inicio de los tratamientos superovulatorios durante la segunda onda de desarrollo folicular ya que esta mostró resultados superiores en cuanto al número de folículos disponibles para la superovulación (de Armas, 2007). Este hallazgo coincide con nuestros resultados, los cuales mostraron un mayor número de folículos pequeños en la segunda onda versus la primera.

Tabla 2.
Promedio de folículos clasificados según tamaño en la primera y segunda onda.

Valores en la misma fila con P < 0,05 difieren entre sí.

Folículos clasificados según tamaño ( ±EE)		Ondas
	n	Primera	Segunda	Significación
Pequeños	532	7.61 ±0.28	8.70 ±0.27	P=0.0049
Medianos	267	1.67 ±0.08	1.71 ±0.08	P=0.6907
Grandes	158	1.17 ±0.03	1.05 ±0.04	P=0.0645

A nuestro criterio, el mayor número de folículos pequeños encontrados en este estudio, pudo estar influenciado por un mayor nivel de FSH en la segunda onda. Al respecto Palma (2008), señaló que el motivo por el cual los folículos primordiales comienzan a desarrollar y se convierten en preantrales no es conocido, sin embargo, la gonadotropina como la FSH puede incrementar el número de folículos preantrales que se convierten en antrales.

Ginther et al. (2001) graficaron la presencia de picos de FSH previamente al inicio de una onda de desarrollo folicular, con niveles similares entre la onda uno y dos. Franco y Uribe (2012), en ovejas, indicaron que el pico de concentraciones plasmáticas de la FSH en la onda dos resulta ser más alto que en la onda uno. Más recientemente Ginther et al. (2015), con vacas Holstein en clima templado encontraron mayores niveles en los picos de FSH de la primera onda que en la segunda onda.

Estos últimos hallazgos discrepan de los nuestros, no obstante, observaciones propuestas por este mismo autor sugieren que las diferencias pudieron deberse a los efectos de raza y clima que eran distintos entre experimentos (Ginther, comunicación personal, 4 de diciembre de 2015).

Como se puede ver en la tabla tres, la mayor cantidad de folículos pequeños antes de la selección del folículo dominante se observó entre los días 2.00 y 4.00 después de iniciado el crecimiento de una nueva onda. Al respecto, Adams et al. (2008) señalaron que la tasa de crecimiento es similar entre todos los folículos hasta los dos días después de iniciada la onda. Bo, (2002) con animales Bos taurus, al sincronizar la onda empleando estradiol más progesterona encontró mayor número de folículos pequeños a los tres y cuatro días después de iniciada la onda.

Por otro lado, Corredor y Páez, (2012) señalaron que el momento de la onda más indicado para iniciar la aspiración folicular es antes de la selección del folículo dominante cuando exista la mayor presencia de folículos pequeños, por lo tanto, el hallazgo en el presente experimento sugiere realizar la aspiración de dos a cuatro días después de iniciada una onda de desarrollo folicular.

Tabla 3.
Días con el mayor número de folículos pequeños y del diámetro máximo del folículo dominante en los ciclos estrales con dos ondas.

El folículo dominante de la primera onda y el folículo dominante de la segunda onda (folículo pre- ovulatorio), alcanzaron su diámetro máximo los días 11.17 y 20.42 respectivamente (Tabla 3).

Denis et al. (2007a), con hembras del genotipo Siboney de Cuba reportaron el diámetro máximo a los días 7.2 y 17.8 del ciclo, en tanto que Solís y de Armas (2010), con novillas mestizas Simmental por Brahman, reportaron el diámetro máximo de la primera onda el día 10.0 y el de la segunda

onda el día 21.17. Estos últimos resultados se asemejan más a los encontrados en este experimento

posiblemente por la mayor similitud genotípica entre los animales estudiados, además de que ambos estudios fueron realizados bajo las mismas condiciones microambientales.

Resulta oportuno señalar que aún no se ha aclarado por completo el mecanismo de selección del folículo dominante. Sin embargo, se sabe que al mismo tiempo que los perfiles de crecimiento del folículo dominante y de los subordinados comienzan a diferenciarse, la FSH declina rápidamente, esta situación propicia que los niveles de FSH se encuentren por debajo de los niveles necesarios para el desarrollo de los folículos subordinados que sufren atresia, mientras el folículo dominante adquiere la habilidad de seguir creciendo con bajos niveles de FSH (Ginther et al., 1996).

Como se observa en la figura uno, el diámetro alcanzado por el folículo dominante pre-ovulatorio de la segunda onda (15,05 mm) fue significativamente mayor (P < 0,05) al del folículo dominante de la primera onda (12,70 mm). Estos resultados concuerdan con los obtenidos por otros autores como Denis et al. (2007a) y Del Valle (2008), quienes indicaron que el folículo preovulatorio presenta un diámetro mayor que los folículos dominantes de las ondas anteriores.

Solís y de Armas (2010) encontraron un mayor tamaño del folículo dominante preovulatorio (14,5 mm), comparado con el folículo dominante de la onda anterior (13,67 mm). Cummins et al. (2012), reportaron con vacas Holstein de alto mérito genético un tamaño máximo del folículo dominante preovulatorio de 17,91 mm versus 16,70 mm del folículo dominante de las ondas anteriores.

Denis (2006) señalaron que el menor tamaño de los folículos dominantes que anteceden a folículo preovulatorio puede ser debido a que estos se desarrollan a mitad del ciclo donde hay altos niveles de progesterona. Fenómeno que a nuestro criterio es responsable de un menor aporte gonadotrópico necesario para el crecimiento de folículo dominante.

Importar tabla Figura 1.
Diámetro máximo alcanzado por el folículo dominante en la primera y en la segunda onda.

Del Valle (2008) señaló que en vacas Bos taurus el folículo dominante de la primera onda puede alcanzar entre 15 y 18 mm, en tanto que el folículo dominante pre-ovulatorio de la segunda onda puede llegar a medir hasta 18 mm. García-Bracho et al. (2015) reportaron diámetros del folículo dominante de 10.03 mm en vacas mestizas, Andringa et al. (2013) con vacas Holando reportaron diámetros máximos de folículos preovulatorios de 16,2 mm, en tanto que Perry et al. (2007) reportaron diámetros máximos de 15.7 mm.

Frandson et al. (2013) indicaron que la cavidad folicular donde ocurre la ovulación, es revestida principalmente por células de la granulosa que inician su multiplicación por influencia de la LH, hasta formar el cuerpo lúteo, cuya producción endocrina primaria es la progesterona. Dicha hormona, durante esta parte del ciclo tiene la función principal de preparar al útero para la preñez, incrementando las secreciones endocrinas del útero e inhibiendo la motilidad uterina para favorecer la implantación. También señalaron que cuando el cuerpo lúteo alcanza su máximo desarrollo la producción de progesterona es máxima y los niveles en plasma se estabilizan.

CONCLUSIONES

El número de folículos que emergen en cada ciclo estral puede ser significativamente distinto incluso en un mismo animal.

El número de folículos que emergen en cada onda de desarrollo folicular es significativamente distinto.

El día con el mayor número de folículos pequeños se da al inicio de la onda de desarrollo folicular.

Los folículos pre-ovulatorios alcanzan un mayor diámetro que los folículos dominantes de la primera onda.

RECOMENDACIÓN

Utilizar los resultados de este estudio como base para el desarrollo de los trabajos biotecnológicos más empleados en reproducción animal, a saber: el diagnóstico reproductivo por ecografía, sincronización del estro para inseminación y transferencia de embriones en tiempo fijo, superovulación y aspiración folicular in vivo.

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