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DETECCIÓN MOLECULAR DE Rickettsia belliiENAmblyomma rotundatum Koch 1884 (IXODIDA: IXODIDAE) RECOLECTADA DE Rhinella marinaL., 1758 (ANURA: BUFONIDAE) EN PANAMÁ
Maria Ogrzewalska; Sergio Bermúdez C.
Maria Ogrzewalska; Sergio Bermúdez C.
DETECCIÓN MOLECULAR DE Rickettsia belliiENAmblyomma rotundatum Koch 1884 (IXODIDA: IXODIDAE) RECOLECTADA DE Rhinella marinaL., 1758 (ANURA: BUFONIDAE) EN PANAMÁ
MOLECULAR DETECTION OF Rickettsia bellii IN Amblyomma rotundatum Koch 1884 (IXODIDA: IXODIDAE) IN PANAMÁ
Tecnociencia, vol. 21, núm. 1, 2019
Universidad de Panamá
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Resumen: Se presenta el hallazgo de la bacteria Rickettsia bellii en la garrapata Amblyomma rotundatum en Panamá.

Palabras clave: Amblyomma rotundatum,Rickettsia no patogénica,sapo,Panamá.

Abstract: The finding of the bacterium Rickettsia bellii in the tick Amblyomma rotundatum is presented to Panama.

Keywords: Amblyomma rotundatum, non-pathogenic Rickettsia, toad, Panama.

Carátula del artículo

DETECCIÓN MOLECULAR DE Rickettsia belliiENAmblyomma rotundatum Koch 1884 (IXODIDA: IXODIDAE) RECOLECTADA DE Rhinella marinaL., 1758 (ANURA: BUFONIDAE) EN PANAMÁ

MOLECULAR DETECTION OF Rickettsia bellii IN Amblyomma rotundatum Koch 1884 (IXODIDA: IXODIDAE) IN PANAMÁ

Maria Ogrzewalska
Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Brasil
Sergio Bermúdez C.
Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud, Panamá
Tecnociencia
Universidad de Panamá, Panamá
ISSN: 1609-8102
ISSN-e: 2415-0940
Periodicidad: Semestral
vol. 21, núm. 1, 2019

Recepción: 19 Octubre 2018

Aprobación: 11 Noviembre 2018


INTRODUCCIÓN

El género Rickettsia comprende alrededor de 27 especies de bacterias Gram negativas pleomórficas y que dependen de células eucariotas para su metabolismo (Parola et al., 2013; Fang et al., 2017). Estas bacterias están estrechamente relacionadas con invertebrados, en especial con insectos y ácaros (Azad et al., 1998; Weinert et al., 2009). Tradicionalmente este género se separa en cuatro grupos: un grupo basal (GB), los que causan las fiebres manchadas (GFM), los agentes de los tifus (GT) y especies intermedias (Walker, 2007; Fang et al., 2017).

Dentro del GB, Rickettsia bellii se aisló por primera vez en Dermacentor variabilis (Say, 1821) en EU y fue designada como la cepa C369-C (Philip et al., 1983). Desde entonces se ha detectado en

≈28 especies de garrapatas en el Nuevo Mundo, tanto en especies Neárticas como del Neotrópico (Philip et al., 1983; Costa et al., 2017; Ogrzewalska et al., 2018). Desde el punto de vista de la salud pública, existe evidencia serológica sobre exposición en mamíferos (Pacheco et al., 2007); no obstante, es considerada como un agente de patogenicidad desconocida para humanos (Parola et al., 2013).

Con el propósito de incrementar el conocimiento de los miembros del género Rickettsia en Panamá y su relación con garrapatas en ese país, en este trabajo se presenta el hallazgo de R. bellii en una garrapata recolectada de un sapo común.

MATERIALES Y MÉTODOS

El 22 de abril del 2018 se colectaron garrapatas de un sapo, Rhinella marina (Linnaeus, 1758) (Anura: Bufonidae), y de una Boa constrictor

L. 1758 (Squamata: Boidae) en la carretera El Llano-Cartí, Chepo (9017’23.47” N, 78059’48.66” O). De estas garrapatas se extrajo ADN utilizando el kit comercial QIAamp® DNA Mini Kit y siguiendo los

protocolos del fabricante. Para la identificación de las especies de garrapatas, en especial las fases inmaduras, se analizó un fragmento de aproximadamente 460 pb del gen mitocondrial 16S ARNr, previamente descrito por Mangold et al. (1998). Los amplicones con tamaño de banda esperada fueron purificados y secuenciados por DNA Analyzer®, según los protocolos del fabricante y siguiendo métodos anteriormente descritos por Otto et al. (2008). Las secuencias parciales obtenidas se compararon con el análisis de Blast (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) y se alinearon con secuencias disponibles para este gen en GenBank.

En el caso de la detección de ADN de Rickettsia, se utilizaron los iniciadores CS-78 5’-GCAAGTATCGGTGAGGATGTAAT-3’ y CS- 323 5’GCTTCCTTAAAATTCAATAAATCAGGAT-3’, que amplifican

una porción de 401 pb del gen citrato sintetasa, (gltA) mediante protocolos descritos anteriormente (Labruna et al. 2004). Para la identificación se siguieron los procedimientos arriba descritos para la purificación y secuenciación

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Del R. marinus se identificó una larva de Amblyomma rotundatum Koch, 1844, por secuenciación del gen 16S rDNA, con una similitud de 100% con secuencias depositadas en GenBank para esta especie. De la B. constrictor fueron colectadas una larva, nueve ninfas, tres hembras y nueve machos, que fueron identificados como Amblyomma dissimile Koch, 1844. De una larva, una ninfa y dos machos de A. dissimile fue extraído ADN para confirmar la identificación taxonómica. Las secuencias obtenidas eran iguales entre ellas y 100% idénticas con secuencias de A. dissimile depositadas en GenBank. Las secuencias de los fragmentos de 16S rDNA fueron depositadas en GenBank con los números MH990349 y MK026013 para A. rotundatum y A. dissimile respectivamente.

Para el gen gltA se obtuvo una similitud del 99.5% (375/377) con el fragmento correspondiente en el genoma completo de R. bellii (CP015010). Esta secuencia fue depositada en GenBank con el número

MH990350. No se obtuvieron amplicones de Rickettsia en A. dissimile.

Amblyomma rotundatum y A. dissimile son parásitos de vertebrados terrestres de sangre fría, con escasos reportes en aves y mamíferos (Gugliemone y Nava 2010; Guglielmone et al., 2014). En forma general ambas especies mantienen una amplia distribución, desde el sur de los Estados Unidos hasta el norte de Argentina, incluyendo algunas islas de las Antillas, y Hawái para A. rotundatum (Guglielmone et al., 2014;Kelehear et al., 2017, Ogrzewalska et al. 2018). Amblyomma rotundatum es partenogenética, por lo cual los reportes de machos son escasos (Keirans y Oliver 1993; Labruna et al., 2005). Debido a que ambas especies son parecidas, algunos autores han señalado dificultades de identificarlas correctamente (Jones et al., 1972; Guglielmone y Nava, 2010). Aun así, los adultos se pueden reconocer por diferencias en las espuelas de la coxa 1 y del escudo (Labruna et al., 2005; Luz et al. 2018).

En Panamá la presencia de A. dissimile se conoce desde inicios del siglo XX (Darling, 1910) y desde entonces ha sido constantemente reportada en anfibios, reptiles y en menor grado en aves y mamíferos (Dunn, 1918; Fairchild et al., 1966; Bermúdez et al., 2012; Domínguez En Prensa). En contraste, hasta el momento solo hay dos registros de

A. rotundatum en Panamá y ambos presentan poca información de colecta. Jones et al. (1972) hacen referencia a registros verificados de esta especie en Panamá a partir de hembras de la colección de garrapatas del Laboratorio de las Montañas Rocosas; no obstante, no se confirma el sitio de colecta. Recientemente Andoh et al. (2015) mencionan que una hembra de esta especie fue extraída de un R. marina en Japón y cuya procedencia era Panamá, además de reportarla infectada con R. bellii. A pesar de lo anterior, en Panamá no hay registros de la cría y comercialización legal de este anfibio para exportación, por lo que dicho registro puede ser considerado en duda.

Por su parte, el primer reporte de R. bellii en Panamá se da a través de un estudio serológico en animales domésticos en El Valle de Antón y que menciona reacción en suero de caballo (Bermúdez et al., 2012). En el caso de garrapatas infectadas, hasta el momento el único reporte en

Panamá es en Amblyomma sabanerae Stoll, 1894 (Bermúdez y Troyo, 2018). Cabe destacar que, aunque no se detalla en ese trabajo el origen de la garrapata, la misma fue colectada de una tortuga del género Kinosternum en Tortí, provincia de Panamá. Consecuentemente, este sería el primer reporte con confirmación de sitio de A. rotundatum infectado con R. bellii en Panamá.

CONCLUSIONES

Este trabajo señala un nuevo registro de A. rotundatum para Panamá, lo cual no solo añade un reporte detallado de localidad y hospedero, sino que presenta un dato adicional de R. bellii en el país. Estos hallazgos ameritarán posteriores estudios que permitan delimitar la distribución de A. rotundatum en Panamá y el grado de infestación de

R. bellii en el país.

Material suplementario
Referencias
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